Plasmide Double Nickase (m) RNF148: sc-427917-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) RNF148 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RNF148 Double Nickase (m) et le plasmide RNF148 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Rnf148. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) RNF148 | sc-427917-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Rnf148** code **RNF148**, une ligase E3 de l’ubiquitine contenant un motif **RING finger**, impliquée dans le renouvellement des protéines dépendant de l’ubiquitine et dans la régulation de l’homéostasie protéique cellulaire. En tant que composante du système ubiquitine–protéasome, RNF148 est supposée influencer la stabilité d’éléments de voies de signalisation qui contrôlent la dynamique des signaux, les réponses au stress et les processus associés au cycle cellulaire. Un dérèglement de l’activité des ligases E3 peut perturber la protéostasie et les programmes transcriptionnels en aval, établissant ainsi un lien mécanistique avec des phénotypes pertinents pour la biologie du développement et la modélisation de maladies dans des systèmes mammifères. L’étude de RNF148 permet d’explorer la régulation par ubiquitination et d’identifier des substrats qui façonnent les transitions d’état cellulaire.
RNF148 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Rnf148 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Rnf148. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Rnf148. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Rnf148.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.