Rnd1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406603

Übersicht

RND1 kodiert Rnd1, eine atypische kleine GTPase der Rho-Familie, die konstitutiv GTP-gebunden ist und vor allem als Regulator der Organisation des Aktinzytoskeletts und der Zelladhäsion fungiert. Die Rnd1-Signalgebung wirkt der RhoA/ROCK-abhängigen Kontraktilität entgegen und beeinflusst dadurch die Bildung von Stressfasern, die Dynamik fokaler Adhäsionen sowie die Zellrundung, mit nachgelagerten Effekten auf Migration und Neuritenauswachsung. Durch Crosstalk mit der Integrin-Signalgebung und Signalwegen des Zytoskelett-Remodelings hilft Rnd1, Veränderungen der Zellmorphologie während der Entwicklung und der Gewebehomöostase zu koordinieren. Eine veränderte RND1-Expression oder ein Ungleichgewicht in diesem Signalweg wurde in der Krebsbiologie mit fehlregulierter Motilität und Invasionsphänotypen sowie in krankheitsrelevanten Modellen mit Störungen neuronaler und vaskulärer Prozesse in Verbindung gebracht.

Das Rnd1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RND1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RND1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RND1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rnd1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RND1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rnd1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RND1-Exone abzielen, die für die Rnd1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RND1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rnd1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Rnd1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RND1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rnd1 HDR-Plasmid (h) und Rnd1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RND1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RND1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.