Plásmido CRISPR de Activación (h) RNase H1: sc-402850-ACT

El gen humano **RNASEH1** codifica la RNasa H1, una endonucleasa nuclear y mitocondrial que degrada específicamente la hebra de ARN de los híbridos ARN:ADN, favoreciendo la eliminación de R-loops durante la transcripción y la replicación. Al procesar cebadores de ARN y resolver intermediarios híbridos, la RNasa H1 contribuye a la estabilidad del genoma, a la replicación y reparación del ADN mitocondrial, y a la coordinación de los conflictos entre replicación y transcripción. La desregulación del recambio de híbridos ARN:ADN se ha vinculado con estrés replicativo y señalización de daño en el ADN, lo que convierte a **RNASEH1** en un nodo relevante para estudiar vías que acoplan el metabolismo de ácidos nucleicos con respuestas celulares al estrés. La alteración de la función de la RNasa H1 también se asocia con fenotipos de disfunción mitocondrial, lo que permite investigaciones mecanísticas del mantenimiento del genoma mitocondrial en contextos relevantes para la enfermedad.

RNase H1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RNASEH1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RNase H1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RNASEH1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RNASEH1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RNase H1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RNASEH1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RNase H1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RNase H1 en células tumorales con expresión de RNASEH1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.