RMI2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407104

Descripción general

RMI2 (inestabilidad genómica mediada por RecQ 2) codifica un componente conservado del disolvasoma BLM–TOP3A–RMI1/2, que promueve la disolución de dobles uniones de Holliday para suprimir los intercambios entre cromátidas hermanas y mantener la estabilidad del genoma. Al coordinar el procesamiento de los intermediarios de la recombinación homóloga, RMI2 favorece un reinicio fiel de la horquilla de replicación y limita eventos de entrecruzamiento aberrantes durante la reparación del ADN. Esta actividad vincula a RMI2 con vías centrales de respuesta al daño del ADN y con el control de los puntos de control del ciclo celular bajo estrés replicativo. La alteración de la función del disolvasoma, incluida una actividad modificada de RMI2, se asocia con un aumento de la inestabilidad cromosómica y con fenotipos observados en defectos de mantenimiento del genoma relacionados con el síndrome de Bloom, lo que lo hace relevante para estudiar mecanismos que contribuyen a procesos mutacionales asociados al cáncer.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RMI2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RMI2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RMI2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RMI2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RMI2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RMI2 para la investigación de la señalización de RMI2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RMI2 críticos para la función de RMI2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RMI2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RMI2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RMI2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RMI2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RMI2 (h) y el plásmido HDR RMI2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RMI2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RMI2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.