Plasmide Double Nickase (h) Ribosomal Protein S3: sc-402327-NIC

RPS3 code la protéine ribosomique humaine S3, un composant central de la petite sous-unité ribosomique 40S, indispensable à l’initiation fidèle de la traduction et au décodage de l’ARNm. Au-delà de son rôle structural dans la biogenèse des ribosomes, RPS3 a été associé aux réponses au stress cellulaire et à la régulation de voies de signalisation qui coordonnent la synthèse protéique avec la croissance et la surveillance des dommages à l’ADN. Une altération de l’homéostasie des protéines ribosomiques peut perturber le contrôle traductionnel et la protéostase, des processus fréquemment impliqués dans la biologie tumorale et d’autres troubles caractérisés par une prolifération cellulaire dérégulée. Par conséquent, RPS3 est largement étudiée dans le contexte de la fonction ribosomique, des programmes transcriptionnels d’adaptation au stress et des mécanismes reliant la traduction à l’intégrité du génome.

Ribosomal Protein S3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RPS3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RPS3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RPS3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RPS3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.