Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ribosomal Protein S18 (h): sc-406494

Présentation

RPS18 code la protéine ribosomique S18, un composant essentiel de la petite sous-unité ribosomique 40S, qui contribue à stabiliser la structure de l’ARNr et favorise un décodage fidèle lors de l’initiation et de l’élongation de la traduction. En tant qu’élément de la biogenèse des ribosomes et de la synthèse protéique globale, RPS18 participe à la protéostasie, à la croissance cellulaire et aux voies de contrôle traductionnel adaptatives au stress. Une expression altérée ou des perturbations des protéines ribosomiques peuvent influencer la signalisation du stress nucléolaire et les points de contrôle dépendants de p53, reliant ainsi le dysfonctionnement ribosomique à des modifications des programmes de prolifération et d’apoptose. Une biogenèse ribosomique et une traduction dérégulées sont des caractéristiques récurrentes des cancers et des ribosomopathies, ce qui fait de RPS18 un point d’entrée utile pour étudier comment la machinerie traductionnelle fondamentale s’articule avec des états cellulaires associés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ribosomal Protein S18 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RPS18 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RPS18, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RPS18 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ribosomal Protein S18.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RPS18 pour l'étude de la signalisation de Ribosomal Protein S18, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RPS18 essentiels à la fonction de Ribosomal Protein S18
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RPS18 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ribosomal Protein S18 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Ribosomal Protein S18 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RPS18. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ribosomal Protein S18 plasmide HDR (h) et le Ribosomal Protein S18 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RPS18 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RPS18 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.