Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ribosomal Protein L39: sc-410990-ACT

RPL39 code la protéine ribosomique L39, un petit composant basique de la grande sous-unité ribosomique 60S, qui contribue à l’assemblage du ribosome et à la stabilité des interactions ARN ribosomique–protéine nécessaires à une traduction cytosolique efficace. En tant qu’élément de la machinerie fondamentale de traduction, RPL39 influence la protéostasie et les programmes de croissance cellulaire, étroitement couplés à la signalisation mTOR, aux réponses intégrées au stress et à la biogenèse des ribosomes. Des perturbations de l’expression des protéines ribosomiques peuvent modifier la capacité et la fidélité de traduction, altérant ainsi la synthèse de régulateurs impliqués dans le contrôle du cycle cellulaire et l’adaptation au stress. Une biogenèse ribosomique et une traduction dérégulées sont des caractéristiques récurrentes de nombreux cancers et de ribosomopathies héréditaires, ce qui fait de RPL39 un nœud utile pour étudier comment la production traductionnelle façonne des phénotypes pertinents pour la maladie.

Ribosomal Protein L39 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RPL39 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ribosomal Protein L39 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RPL39 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RPL39, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ribosomal Protein L39. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RPL39 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ribosomal Protein L39 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ribosomal Protein L39 dans les cellules tumorales présentant une expression de RPL39 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.