rhodopsinCRISPR激活质粒(h): sc-401026-ACT

人类 RHO 基因编码视紫红质（rhodopsin），这是一种对光敏感的 G 蛋白偶联受体（GPCR），嵌入于杆状光感受器外节盘膜中，负责启动光转导级联反应。吸收光子后，视紫红质激活转导蛋白（transducin）以调控 cGMP 信号，从而控制环核苷酸门控通道（CNG 通道）的活性，并引发下游膜超极化，这对暗光视觉至关重要。RHO 的表达与蛋白周转与视网膜稳态过程紧密相关，包括视觉循环中的发色团再生、向外节的转运，以及受调控的 GPCR 去活化。RHO 的失调或突变与遗传性视网膜变性相关，因此它是研究 GPCR 信号机制、光感受器应激反应以及视网膜模型中基因调控的重要靶点。

rhodopsin CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性RHO的表达。

rhodopsin CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的RHO基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于RHO转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性rhodopsin表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的RHO位点，并能够研究内源性位点上依赖于rhodopsin的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在RHO表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟rhodopsin通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。