Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Rho T1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401601
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Rho T1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Rho T1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Rho T1 Anticuerpo (A-8): sc-398520
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Rho T1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401601 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
RHOT1 codifica Rho T1 (Miro1), una GTPasa atípica de la familia Rho anclada a la membrana mitocondrial externa que acopla las mitocondrias al transporte basado en microtúbulos mediante interacciones con adaptadores TRAK y motores de kinesina/dineína. Al integrar la actividad GTPasa con la detección de calcio mediada por dominios EF-hand, Rho T1 coordina el tráfico, el posicionamiento y el recambio mitocondrial, influyendo en la polarización neuronal, la función sináptica y la distribución de energía. RHOT1 también contribuye al control de calidad mitocondrial mediante el crosstalk con las vías de mitofagia dependientes de PINK1/Parkin y la regulación de la dinámica de los orgánulos en los sitios de contacto entre el RE y las mitocondrias. La desregulación del transporte y la mitofagia dependientes de RHOT1 se ha vinculado con respuestas de estrés celular y se estudia con frecuencia en el contexto de la neurodegeneración y otros trastornos caracterizados por disfunción mitocondrial.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Rho T1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RHOT1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RHOT1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RHOT1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Rho T1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RHOT1 para la investigación de la señalización de Rho T1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de RHOT1 críticos para la función de Rho T1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RHOT1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Rho T1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Rho T1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RHOT1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Rho T1 (h) y el plásmido HDR Rho T1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RHOT1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RHOT1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.