Plasmide Double Nickase (h) RHAMM: sc-402431-NIC

Le gène humain **HMMR** code **RHAMM** (récepteur de la motilité médiée par l’hyaluronane), une protéine se liant à l’hyaluronane qui se localise à la surface cellulaire, dans le cytoplasme et au fuseau mitotique afin de coordonner la motilité et la prolifération cellulaires. RHAMM intègre les signaux de l’hyaluronane de la matrice extracellulaire avec le remodelage du cytosquelette, l’organisation du centrosome et du fuseau, ainsi que la signalisation associée à MAPK/ERK qui soutient la progression du cycle cellulaire et la migration. Une expression et une localisation dérégulées de HMMR/RHAMM ont été associées à une altération de la fidélité mitotique, à un comportement invasif et à des phénotypes liés aux tumeurs dans de multiples contextes cancéreux. Par conséquent, HMMR est largement étudié dans les voies régissant la signalisation de la matrice extracellulaire, des transitions de type épithélio-mésenchymateux et la stabilité génomique liée à la mitose.

RHAMM Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HMMR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HMMR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HMMR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HMMR.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.