RGS4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-418013

概要

RGS4はRegulator of G protein Signaling 4（Gタンパク質シグナル制御因子4）をコードしており、GαサブユニットのGTP加水分解を促進することで、GPCR（Gタンパク質共役型受容体）駆動のシグナル伝達の終結を加速するGTPase活性化タンパク質です。cAMP/PKAやPLCβ/Ca2+シグナル伝達などの下流のセカンドメッセンジャー経路を抑制することにより、RGS4は受容体の脱感作、神経細胞の興奮性、刺激依存的な転写出力の形成に関与します。複数の組織で発現し、とりわけ神経系で重要な役割を担っており、シナプスシグナルの調節や神経発生過程の制御との関連が示されています。RGS4の発現やシグナルのバランスの変化は、神経精神疾患や認知に関わる表現型と関連づけられており、GPCR経路制御のメカニズム研究において重要な標的となります。

RGS4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRGS4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RGS4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RGS4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RGS4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RGS4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RGS4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RGS4の機能に不可欠なRGS4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RGS4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RGS4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRGS4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RGS4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RGS4 HDRプラスミド（h）および RGS4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRGS4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRGS4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。