RGS17 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425225

Übersicht

Rgs17 kodiert den Regulator der G‑Protein‑Signalübertragung 17 (RGS17), ein Mitglied der RGS‑Familie, das die GTP‑Hydrolyse an Gα‑Untereinheiten beschleunigt und dadurch GPCR‑vermittelte Signalübertragung beendet. Durch die Dämpfung der Aktivität heterotrimerer G‑Proteine beeinflusst RGS17 die cAMP/PKA‑Signalgebung, nachgeschaltete Kinasekaskaden sowie Transkriptionsprogramme, die mit neuronaler Kommunikation und Antworten sekretorischer Zellen verknüpft sind. In Mausmodellen wurde eine veränderte Rgs17‑Expression mit Veränderungen neurobehavioraler Phänotypen sowie mit fehlregulierten Signalnetzwerken in Verbindung gebracht, die häufig in Modellen der Tumorbiologie und Metastasierung untersucht werden. Diese Eigenschaften machen RGS17 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um die Signalstärke von GPCR‑Signalen, das Zusammenspiel zwischen Signalwegen (Cross‑Talk) und kontextabhängige Transkriptionsausgänge zu untersuchen.

Das RGS17 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Rgs17-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Rgs17-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Rgs17 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RGS17-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Rgs17-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RGS17-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Rgs17-Exone abzielen, die für die RGS17-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Rgs17-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RGS17 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom RGS17 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Rgs17-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RGS17 HDR-Plasmid (m) und RGS17 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Rgs17-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Rgs17-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.