Plasmide CRISPR d'Activation (h) RGS16: sc-403744-ACT

RGS16 (Regulator of G protein Signaling 16) code une protéine activatrice de la GTPase qui atténue la signalisation des sous-unités Gα hétérotrimériques afin de limiter les voies de seconds messagers déclenchées par les GPCR, notamment les réponses via l’AMPc et MAPK/ERK. En accélérant l’hydrolyse du GTP sur Gαi/o et des protéines G apparentées, RGS16 module la durée et l’amplitude des signaux dans des processus tels que les réponses aux chimiokines, la signalisation inflammatoire et le contrôle du cycle cellulaire. Des altérations de l’expression de RGS16 ont été rapportées dans de multiples contextes pathologiques, reflétant son rôle dans la régulation de programmes transcriptionnels associés à la prolifération et à l’immunité. Ces propriétés font de RGS16 un nœud utile pour disséquer le remodelage des voies GPCR et les phénotypes en aval dans des modèles cellulaires humains.

RGS16 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RGS16 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RGS16 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RGS16 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RGS16, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RGS16. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RGS16 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RGS16 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RGS16 dans les cellules tumorales présentant une expression de RGS16 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.