RFC-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422982
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- RFC-1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico RFC-1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SLC19A1 Anticuerpo (D-6): sc-271276
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
RFC-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422982 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Slc19a1 codifica el transportador de folato reducido RFC-1, un importante transportador de membrana plasmática responsable de la captación celular de folatos reducidos y de metabolitos relacionados del metabolismo de un carbono. Al controlar la disponibilidad intracelular de folato, RFC-1 respalda la biosíntesis de nucleótidos, las reacciones de metilación y la homeostasis redox, vinculando este transportador con procesos centrales como la replicación del ADN y la regulación epigenética. Las alteraciones en la actividad de Slc19a1 pueden modificar el flujo metabólico dependiente de folato e influir en la capacidad proliferativa, la estabilidad genómica y los programas de diferenciación en células de mamífero. En modelos murinos, la función de RFC-1 se examina con frecuencia en el contexto del metabolismo del folato, la biología del desarrollo y los mecanismos subyacentes a fenotipos sensibles al folato.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO RFC-1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Slc19a1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Slc19a1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Slc19a1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RFC-1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Slc19a1 para la investigación de la señalización de RFC-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Slc19a1 críticos para la función de RFC-1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Slc19a1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido RFC-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido RFC-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Slc19a1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RFC-1 (m) y el plásmido HDR RFC-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Slc19a1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Slc19a1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.