Plásmido CRISPR de Activación (h) Retinoschisin: sc-403895-ACT

RS1 codifica la retinosquisina, una proteína de adhesión secretada y enriquecida en la retina que se ensambla en oligómeros unidos por enlaces disulfuro y contribuye a la organización estructural de la retina neural. La retinosquisina aporta cohesión intercelular e integridad sináptica en la red de fotorreceptores y células bipolares, e influye en procesos que mantienen la arquitectura laminar y la homeostasis de fluidos. En el tejido retiniano, la función de RS1 está estrechamente relacionada con las interacciones con la matriz extracelular y la estabilidad de las uniones célula-célula, que modulan la transmisión de señales y la resiliencia del tejido. La alteración de la expresión de RS1 o del ensamblaje de la retinosquisina se asocia a fenotipos de retinosquisis ligada al X y se estudia ampliamente en modelos de degeneración retiniana y disfunción sináptica.

Retinoschisin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RS1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Retinoschisin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RS1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RS1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Retinoschisin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RS1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Retinoschisin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Retinoschisin en células tumorales con expresión de RS1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.