Plasmide Double Nickase (m) Rent2: sc-435860-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Rent2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Rent2 Double Nickase (m) et le plasmide Rent2 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Upf2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Rent2 Antibody (G-10): sc-374230
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Rent2 | sc-435860-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) Rent2 | sc-435860-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Upf2 (Rent2) chez la souris code un facteur essentiel de surveillance des ARN, requis pour la dégradation des ARNm médiée par les codons non-sens (NMD), une voie qui détecte et élimine les transcrits contenant des codons stop prématurés afin de maintenir la fidélité du protéome. RENT2 agit avec des composants centraux du NMD tels qu’UPF1 et UPF3 et couple la terminaison de la traduction au remodelage des mRNP, influençant la stabilité des ARNm, l’issue de l’épissage alternatif et la régulation du transcriptome en réponse au stress. L’activité d’Upf2 affecte le développement neuronal, l’homéostasie immunitaire et l’intégrité de la lignée germinale, et un NMD dérégulé a été associé à des phénotypes neurodéveloppementaux, au tamponnement de transcrits pertinents en cancérologie, ainsi qu’à des réponses modifiées au stress génotoxique ou protéotoxique. La perturbation expérimentale d’Upf2 est largement utilisée pour étudier le contrôle qualité des ARN, la surveillance traductionnelle et la robustesse de l’expression génique dans les cellules de mammifères.
Rent2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Upf2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Upf2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Upf2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Upf2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.