Plásmido CRISPR de Activación (h) Renin Receptor: sc-402411-ACT

ATP6AP2 codifica el receptor humano de la renina (también conocido como receptor de (pro)renina), una proteína de membrana multifuncional que participa en el sistema renina–angiotensina al unirse a la renina y a la prorenina y modular la señalización aguas abajo de manera independiente de la generación de angiotensina. Más allá de la señalización hormonal, ATP6AP2 se asocia con el complejo H+-ATPasa vacuolar (V-ATPasa) y contribuye a la acidificación endosomal/lisosomal, al tráfico de receptores y a la homeostasis celular, con vínculos descritos con la regulación de la vía Wnt/β-catenina. A través de estas funciones, el receptor de la renina influye en procesos como el crecimiento celular, las respuestas al estrés y la remodelación tisular. La expresión o función desregulada de ATP6AP2 se ha asociado con fenotipos cardiorrenales y metabólicos, y también se ha investigado en contextos como la fibrosis, la señalización relacionada con la hipertensión y la biología tumoral.

Renin Receptor El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ATP6AP2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Renin Receptor El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ATP6AP2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ATP6AP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Renin Receptor. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ATP6AP2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Renin Receptor en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Renin Receptor en células tumorales con expresión de ATP6AP2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.