Plasmide CRISPR d'Activation (h) Renin: sc-400890-ACT

Le gène humain **REN** code la rénine, une protéase aspartique qui initie le système rénine–angiotensine–aldostérone en clivant l’angiotensinogène pour générer l’angiotensine I, régulant ainsi la production d’angiotensine II et la signalisation en aval qui contrôle le tonus vasculaire et l’équilibre électrolytique. L’activité de la rénine s’intègre à des boucles de rétrocontrôle endocrinien impliquant l’aldostérone, la signalisation sympathique et la gestion rénale du sodium, reliant la physiologie rénale à l’hémodynamique systémique. Une expression dérégulée de **REN** ou l’activation de la voie de la rénine est impliquée dans l’hypertension, le remodelage cardiovasculaire et la physiopathologie associée à la maladie rénale chronique. En tant qu’enzyme sécrétée produite principalement par les cellules juxtaglomérulaires, la rénine constitue aussi un point d’entrée commode pour étudier le couplage stimulus–sécrétion et le contrôle transcriptionnel dans des modèles cellulaires rénaux et vasculaires.

Renin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de REN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Renin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus REN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription REN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Renin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus REN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Renin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Renin dans les cellules tumorales présentant une expression de REN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.