RelB CRISPR Activation Plasmid (m): sc-422643-ACT

Relb kodiert RelB, ein Mitglied der NF-κB/Rel-Familie, das als Transkriptionsfaktor eine zentrale Rolle im nichtkanonischen NF-κB-Signalweg spielt. RelB bildet häufig Heterodimere mit p52 und reguliert Genprogramme, die die Differenzierung von Immunzellen, die Antigenpräsentation, die Organogenese lymphoider Organe sowie entzündliche Signalübertragung nachgeschaltet an Rezeptoren wie BAFFR, CD40 und den Lymphotoxin-β-Rezeptor steuern. In Mausmodellen beeinflusst die RelB-Aktivität die Reifung dendritischer Zellen und den Crosstalk zwischen Stroma und Immunsystem und prägt dadurch Zytokin- und Chemokin-Netzwerke, die die Gewebehomöostase koordinieren. Eine fehlregulierte RelB-abhängige Transkription wird mit aberranter Immunaktivierung und chronisch entzündlichen Zuständen in Verbindung gebracht, was Relb zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von Signalwegen und transkriptionellen Netzwerken macht.

RelB Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Relb-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

RelB Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Relb-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Relb-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen RelB-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Relb-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von RelB-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des RelB-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Relb-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.