Plasmide CRISPR d'Activation (m) RELA/NFκB p65: sc-422642-ACT

Rela code la sous-unité RELA/NFκB p65, un régulateur transcriptionnel central de la signalisation canonique NF-κB qui contrôle des programmes géniques inductibles impliqués dans l’inflammation, l’immunité innée et adaptative, la survie cellulaire et les réponses au stress. Dans les cellules murines, p65 forme des dimères fonctionnels, le plus souvent avec NFKB1/p50, et se transloque vers le noyau après la dégradation des inhibiteurs IκB médiée par IKK, intégrant des signaux provenant du TNF, de l’IL-1, des TLR, des récepteurs antigéniques et des voies de réponse aux dommages de l’ADN. La transcription dépendante de RELA module l’expression de cytokines, chimiokines, molécules d’adhérence et facteurs anti-apoptotiques, façonnant l’activation des macrophages, la fonction des lymphocytes et l’homéostasie tissulaire. Une activité NF-κB/RELA dérégulée est associée à des états inflammatoires chroniques, à l’auto-immunité et à des réseaux de signalisation oncogéniques, faisant de Rela une cible fréquente pour des études mécanistiques de la régulation immunitaire et de la transcription adaptative au stress.

RELA/NFκB p65 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Rela sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RELA/NFκB p65 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Rela dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Rela, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RELA/NFκB p65. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Rela natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RELA/NFκB p65 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RELA/NFκB p65 dans les cellules tumorales présentant une expression de Rela silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.