Reg IIIα Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404278
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Reg IIIα El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Reg IIIα, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Reg IIIα Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404278 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
REG3A codifica la lectina secretada Reg IIIα, una proteína antimicrobiana de la familia de lectinas tipo C expresada predominantemente por células epiteliales del tracto gastrointestinal y otras superficies mucosas. Reg IIIα se une a carbohidratos de la pared celular microbiana, refuerza la defensa innata de la barrera y contribuye a la homeostasis huésped–microbiota durante la inflamación. Su expresión está regulada por programas epiteliales impulsados por citocinas, incluida la señalización IL-22/STAT3 y respuestas asociadas a NF-κB, y se utiliza con frecuencia como indicador de lesión y reparación de la mucosa. Se han descrito niveles desregulados de REG3A en afecciones inflamatorias y metabólicas que afectan a tejidos de barrera, lo que la hace relevante para estudios de respuestas de estrés epitelial e inflamación desencadenada por microbios.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Reg IIIα (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen REG3A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del REG3A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de REG3A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Reg IIIα.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en REG3A para la investigación de la señalización de Reg IIIα, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de REG3A críticos para la función de Reg IIIα
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de REG3A para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Reg IIIα CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Reg IIIα CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus REG3A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Reg IIIα (h) y el plásmido HDR Reg IIIα (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología REG3A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana REG3A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.