REEP6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-427671

Übersicht

Reep6 kodiert das Rezeptor-Expressions‑fördernde Protein 6 (REEP6), ein Mitglied der REEP‑Familie, die an der Formgebung des tubulären endoplasmatischen Retikulums beteiligt ist und den Proteintransport innerhalb des frühen sekretorischen Weges koordiniert. In Maus‑Zellen ist REEP6 mit Membrankrümmung sowie der Organisation von ER‑Subdomänen assoziiert, die eine effiziente Verarbeitung und den Transport von Transmembranproteinen unterstützen – mit nachgeschalteten Auswirkungen auf die zelluläre Homöostase und Stressantworten. REEP6 ist für Studien zur neuronalen und sensorischen Biologie von hoher Relevanz, da REEP‑Familienproteine mit Prozessen in Verbindung gebracht wurden, die spezialisierte Membrankompartimente und die Proteostase aufrechterhalten. Eine Fehlregulation der ER‑Architektur und von Transportwegen unter Beteiligung von REEP‑Proteinen wird häufig im Kontext von Neurodegeneration und Funktionsstörungen sensorischer Systeme untersucht und unterstützt mechanistische Untersuchungen in entsprechenden Modellen.

Das REEP6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Reep6-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Reep6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Reep6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die REEP6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Reep6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der REEP6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Reep6-Exone abzielen, die für die REEP6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Reep6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom REEP6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom REEP6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Reep6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das REEP6 HDR-Plasmid (m) und REEP6 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Reep6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Reep6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.