Plasmide CRISPR d'Activation (h) Reelin: sc-401862-ACT

Le gène humain **RELN** code la réeline, une grande glycoprotéine sécrétée de la matrice extracellulaire qui coordonne la migration neuronale, la lamination corticale et la synaptogenèse au cours du développement cérébral, ainsi que dans les circuits de l’adulte. La réeline signale principalement via les récepteurs des lipoprotéines **VLDLR** et **LRP8 (ApoER2)** pour activer l’adaptateur **DAB1**, modulant les kinases de la famille Src et les dynamiques cytosquelettiques en aval qui façonnent la croissance des neurites et la plasticité synaptique. Les voies dépendantes de **RELN** s’entrecroisent avec la transmission glutamatergique, le remodelage des épines dendritiques et des programmes géniques dépendants de l’activité qui influencent la connectivité des réseaux. Une expression ou une signalisation **RELN** dérégulée a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ce qui en fait une cible majeure pour les études mécanistiques de la formation des circuits et de la fonction synaptique.

Reelin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RELN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Reelin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RELN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RELN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Reelin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RELN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Reelin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Reelin dans les cellules tumorales présentant une expression de RELN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.