RDH10 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-430225-LAC

Il gene murino **Rdh10** codifica la retinolo deidrogenasi 10 (RDH10), un enzima NAD-dipendente che catalizza l’ossidazione del retinolo a retinaldeide, una tappa limitante della velocità nella biosintesi dell’acido retinoico all-trans. Controllando la disponibilità di acido retinoico, RDH10 influenza i programmi trascrizionali mediati dai recettori dell’acido retinoico (RAR/RXR) che coordinano il patterning embrionale, l’organogenesi, la differenziazione epiteliale e la regolazione dei geni metabolici. Un’attività alterata di RDH10 perturba l’omeostasi dei retinoidi e le reti di segnalazione dello sviluppo a valle, rendendolo rilevante per studi su malformazioni congenite e differenziazione tissutale. RDH10 è anche utilizzato come strumento per indagare il crosstalk dipendente dai retinoidi con le vie Wnt, FGF e Hedgehog in modelli di morfogenesi e rigenerazione.

Le particelle di attivazione lentivirale RDH10 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Rdh10 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale RDH10 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Rdh10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di RDH10. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Rdh10 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.