Plasmide CRISPR/Cas9 KO RBM45 (h): sc-406889

Présentation

RBM45 (protéine 45 à motif de liaison à l’ARN) est une protéine de liaison à l’ARN conservée, impliquée dans la régulation post‑transcriptionnelle de l’expression génique via des interactions avec le pré‑ARNm et des complexes de maturation/traitement de l’ARN. Elle a été associée au contrôle de l’épissage, à la stabilité des transcrits et à l’assemblage de ribonucléoprotéines en réponse au stress, des processus qui façonnent les programmes d’expression génique des neurones et des cellules gliales. RBM45 est fréquemment étudiée dans le contexte de la neurodégénérescence et du dérèglement du métabolisme de l’ARN, notamment en raison de son association à l’agrégation pathogène de protéines et à des altérations de la dynamique des granules d’ARN. La perturbation de la fonction de RBM45 peut donc être utilisée pour explorer les voies reliant le traitement de l’ARN, les réponses cellulaires au stress et la protéostasie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RBM45 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RBM45 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RBM45, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RBM45 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RBM45.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RBM45 pour l'étude de la signalisation de RBM45, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RBM45 essentiels à la fonction de RBM45
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RBM45 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RBM45 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RBM45 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RBM45. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RBM45 plasmide HDR (h) et le RBM45 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RBM45 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RBM45 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.