RBM35B Double Nickase Plasmid (h): sc-408008-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RBM35B Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RBM35B Double-Nickase-Plasmid (h) und RBM35B Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ESRP2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RBM35B Double Nickase Plasmid (h) | sc-408008-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RBM35B Double Nickase Plasmid (h2) | sc-408008-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ESRP2 (RBM35B) ist ein epithelzell-spezifisches RNA-bindendes Protein, das alternative prä-mRNA-Spleißprogramme reguliert, die an Zellpolarität, Adhäsion und Differenzierung beteiligt sind. Durch die Modulation der Exon-Inklusion in Netzwerken, die mit der epithelial-mesenchymalen Transition (EMT) verknüpft sind, trägt ESRP2 zur Aufrechterhaltung der epithelialen Identität bei und beeinflusst Signalausgaben aus Signalwegen wie Rezeptor-Tyrosinkinasen sowie TGF-β-assoziierten Transkriptionsantworten. Eine dysregulierte ESRP2-Expression oder Spleißaktivität wurde mit einer veränderten Isoformnutzung in krebsbezogenen Progressionsmodellen sowie mit Störungen der epithelialen Entwicklung und Barrierefunktion in Verbindung gebracht. Als Spleißregulator bietet ESRP2 einen mechanistischen Ansatzpunkt, um isoformabhängige Phänotypen, die Umgestaltung des Transkriptoms und Defekte der RNA-Prozessierung in humanen Zellsystemen zu untersuchen.
RBM35B Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ESRP2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ESRP2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ESRP2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ESRP2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.