RBM15 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417289

Übersicht

RBM15 (RNA-Bindungsmotiv-Protein 15) ist ein RNA-bindender Regulator, der an der posttranskriptionellen Genkontrolle beteiligt ist, darunter alternatives Spleißen, mRNA‑Prozessierung und Entscheidungen über das Schicksal von Transkripten, die den Zellzustand prägen. Es wurde mit RNA‑Modifikationen und epitranskriptomischer Regulation in Verbindung gebracht, unter anderem durch Interaktionen mit der m6A‑assoziierten Maschinerie, wodurch Programme des RNA‑Metabolismus beeinflusst werden, die für Hämatopoese und Differenzierung relevant sind. RBM15 wird außerdem in transkriptionellen und chromatinassoziierten Kontexten untersucht, die die RNA‑Prozessierung mit den Genexpressionsausgängen während der Entwicklung verknüpfen. Eine Fehlregulation von RBM15 wurde mit Signalwegen in Zusammenhang gebracht, die für hämatologische Malignome relevant sind, sowie mit einer veränderten Linienfestlegung, was es zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung RNA‑zentrierter Mechanismen in der Krankheitsbiologie macht.

Das RBM15 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RBM15-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RBM15-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RBM15 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RBM15-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RBM15-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RBM15-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RBM15-Exone abzielen, die für die RBM15-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RBM15-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RBM15 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RBM15 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RBM15-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RBM15 HDR-Plasmid (h) und RBM15 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RBM15-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RBM15-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.