Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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RASSF1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401931
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- RASSF1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico RASSF1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:RASSF1 Anticorpo (3F3): sc-58470
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
RASSF1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401931 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
RASSF1 (membro 1 da família de domínios de associação a Ras) é uma proteína de andaime (scaffold) que integra sinais relacionados a Ras com a sinalização Hippo e a dinâmica do citoesqueleto para regular a progressão do ciclo celular, a apoptose e a estabilidade dos microtúbulos. Por meio de interações com MST1/2 e outros componentes da via, RASSF1 sustenta programas pró-apoptóticos e de restrição do crescimento que influenciam a inibição por contato e a integridade genômica. O gene é frequentemente silenciado de forma epigenética por hipermetilação do promotor em uma ampla variedade de tumores, tornando-o um locus supressor tumoral comumente estudado na biologia do câncer. Alterações na atividade de RASSF1 também têm sido associadas a desregulação do controle mitótico e da sinalização de resposta ao estresse, com efeitos a jusante sobre a proliferação e fenótipos de sobrevivência celular.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO RASSF1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene RASSF1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do RASSF1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do RASSF1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína RASSF1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de RASSF1 para a investigação da sinalização de RASSF1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) RASSF1 críticos para a função RASSF1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos RASSF1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo RASSF1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo RASSF1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus RASSF1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo RASSF1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR RASSF1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia RASSF1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo RASSF1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.