RASL11A Lentiviral Activation Particles (h): sc-409106-LAC

RASL11A kodiert ein kleines, Ras-ähnliches GTP-bindendes Protein innerhalb der RAS-Superfamilie, das vermutlich die Signaltransduktion moduliert, indem es den Zyklus von Guanin-Nukleotiden mit der Dynamik nachgeschalteter Signalwege koppelt. Durch die Beeinflussung Ras-verwandter molekularer Schalter ist RASL11A an Prozessen wie der Kontrolle der Proliferation, der Organisation des Zytoskeletts und dem vesikelassoziierten Transport beteiligt, die den Zellzustand und die Stressantwort prägen. Veränderte Expressionsmuster von RASL11A wurden in mehreren Krebs- und Gewebeumbau-Kontexten beschrieben, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt zur Untersuchung der Umverdrahtung onkogener Signalwege und differenzierungsassoziierter Phänotypen unterstützt. Die Untersuchung der RASL11A-Regulation kann daher Aufschluss darüber geben, wie Netzwerke der Ras-Familie Signale integrieren, die Wachstumskontrolle und zelluläre Plastizität beeinflussen.

RASL11A Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente RASL11A-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

RASL11A Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der RASL11A-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen RASL11A-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen RASL11A-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.