RasGRP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (bovine): sc-437322

Descripción general

RasGRP1 (proteína liberadora de guanil de RAS 1) es un factor de intercambio de nucleótidos de guanina (GEF) para Ras, sensible al diacilglicerol y al Ca²⁺, que conecta la señalización de la fosfolipasa C inducida por receptores con la activación de las GTPasas de la familia Ras. Al promover el intercambio de GDP por GTP en Ras, RasGRP1 ayuda a propagar la señalización MAPK/ERK y se integra con la dinámica de la vía PI3K, modulando programas de activación, proliferación y diferenciación celular. En linajes inmunitarios, RasGRP1 es un mediador clave de la señalización del receptor de antígeno y contribuye a establecer los umbrales de las respuestas transcripcionales posteriores. La desregulación de la señalización de RasGRP1 se ha asociado con alteraciones de la homeostasis inmunitaria y con contextos de señalización oncogénica en los que el control de la vía Ras está perturbado, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de transducción de señales y regulación del destino celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RasGRP1 (bovine) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen en líneas celulares bovine. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RasGRP1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en para la investigación de la señalización de RasGRP1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de críticos para la función de RasGRP1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RasGRP1 CRISPR/Cas9 KO (bovine) y el plásmido RasGRP1 CRISPR/Cas9 KO (bovine2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus . Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RasGRP1 (bovine) y el plásmido HDR RasGRP1 (bovine2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.