Plasmide CRISPR/Cas9 KO RAPGEF6 (h): sc-403816

Présentation

RAPGEF6 (également connu sous le nom de PDZ-GEF2) code un facteur d’échange de nucléotides guanyliques qui active les GTPases Rap1 et Rap2, reliant les signaux initiés par les récepteurs au cycle d’activation/inactivation des petites GTPases et au recrutement des effecteurs en aval. Grâce au contrôle dépendant de Rap de la signalisation « inside-out » des intégrines, de l’adhésion médiée par les cadhérines et de l’organisation du cytosquelette, RAPGEF6 contribue à la régulation de la polarité cellulaire, de la migration et de la stabilité des jonctions. Ses domaines PDZ et d’association à Ras favorisent des interactions d’échafaudage qui coordonnent la signalisation au niveau des membranes et des complexes d’adhésion. La dérégulation de la signalisation RapGEF/Rap a été impliquée dans des phénotypes d’altération de l’adhésion et de la motilité cellulaires, pertinents pour la biologie du cancer, les processus de neurodéveloppement et le trafic des cellules immunitaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RAPGEF6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RAPGEF6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RAPGEF6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RAPGEF6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RAPGEF6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RAPGEF6 pour l'étude de la signalisation de RAPGEF6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RAPGEF6 essentiels à la fonction de RAPGEF6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RAPGEF6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RAPGEF6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RAPGEF6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RAPGEF6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RAPGEF6 plasmide HDR (h) et le RAPGEF6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RAPGEF6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RAPGEF6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.