Plásmido CRISPR de Activación (h) RAP1: sc-401709-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) RAP1 es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) RAP1 incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR RAP1 (h) y el plásmido de activación CRISPR RAP1 (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de TERF2IP. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: RAP1 Anticuerpo (4C8/1): sc-53434
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) RAP1 | sc-401709-ACT | 20 µg | $397.00 |
El TERF2IP humano codifica RAP1, un factor asociado al complejo shelterina que se une a TRF2 para regular la protección de los telómeros, la homeostasis de la longitud telomérica y la supresión de la señalización aberrante de daño en el ADN en los extremos cromosómicos. Más allá de los telómeros, RAP1 influye en programas transcripcionales y en la organización de la cromatina, y se ha relacionado con la señalización inflamatoria asociada a NF-κB y con vías más amplias de estabilidad genómica. La alteración de la función de RAP1 puede modificar la integridad telomérica, las respuestas de los puntos de control y fenotipos similares a la senescencia celular, lo que convierte a TERF2IP en un objetivo relevante para estudios sobre mecanismos de mantenimiento del genoma. La biología telomérica desregulada y las redes de señalización asociadas a RAP1 se investigan con frecuencia en el contexto de la transformación oncogénica y la disfunción celular asociada al envejecimiento, sin implicar resultados clínicos.
RAP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TERF2IP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
RAP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TERF2IP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TERF2IP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RAP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TERF2IP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RAP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RAP1 en células tumorales con expresión de TERF2IP silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.