Rap 2A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403109

Übersicht

RAP2A kodiert Rap2A, eine Ras-verwandte kleine GTPase, die zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen wechselt, um die Signaltransduktion nachgeschaltet von Zelloberflächenrezeptoren zu regulieren. Rap2A trägt zur Umgestaltung des Zytoskeletts, zum Vesikeltransport und zur Zelladhäsion bei, indem es Signalwege koordiniert, die die Aktindynamik und die Membranorganisation beeinflussen, einschließlich Crosstalk mit der MAPK-Signalübertragung und Netzwerken der Rho-Familie von GTPasen. Über seine Funktionen bei der Kontrolle von Zellpolarität, Migration und Proliferation wurde eine veränderte RAP2A-Aktivität mit fehlreguliertem Wachstum und Invasionsphänotypen in mehreren Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, darunter Krebs und entzündliche Erkrankungen. RAP2A ist daher ein nützlicher Knotenpunkt, um zu untersuchen, wie Schaltkreise kleiner GTPasen rezeptorgetriebene Signalgebung und zelluläre Plastizität feinabstimmen.

Das Rap 2A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RAP2A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RAP2A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RAP2A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rap 2A-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RAP2A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rap 2A-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RAP2A-Exone abzielen, die für die Rap 2A-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RAP2A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rap 2A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Rap 2A CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RAP2A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rap 2A HDR-Plasmid (h) und Rap 2A HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RAP2A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RAP2A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.