Plasmide Double Nickase (h) Ran BP-M: sc-403548-NIC

RANBP9 code Ran BP-M, une protéine adaptatrice de liaison à Ran qui sert de protéine d’échafaudage au sein de complexes multiprotéiques, reliant le transport nucléocytoplasmique à la transduction du signal et à la régulation du cytosquelette. Ran BP-M a été impliquée dans la coordination d’interactions protéine–protéine qui influencent le contrôle transcriptionnel, les réponses aux dommages de l’ADN et des processus associés au cycle cellulaire. Par ces fonctions, RANBP9 peut moduler des voies pertinentes pour l’adaptation au stress cellulaire et la protéostasie, ce qui en fait un nœud utile pour étudier des réseaux régulateurs dépendants du contexte. Une expression de RANBP9 altérée ou une modification de la composition de ses complexes a été associée à des phénotypes observés en recherche en oncologie et en neurobiologie, ce qui appuie son étude dans des systèmes modèles pertinents pour les maladies.

Ran BP-M Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RANBP9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RANBP9. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RANBP9. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RANBP9.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.