Ral BP-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402752-ACT

RALBP1 kodiert Ral BP-1 (auch RLIP76 genannt), einen multifunktionalen Effektor der Ral-GTPasen, der Signalübertragung mit Membrantransport und Zytoskelettdynamik verknüpft. Ral BP-1 ist über Interaktionen mit Adaptoren und Signalwegen kleiner GTPasen an der clathrinabhängigen Endozytose, der Internalisierung von Rezeptoren und dem Aktin-Remodeling beteiligt und koppelt so die Aktivität von RalA/RalB an Zellmotilität und stressresponsive zelluläre Programme. Das Protein wird außerdem mit ATP-abhängigen Transportfunktionen und zellulären Entgiftungsantworten in Verbindung gebracht, was das Überleben unter oxidativem oder xenobiotischem Stress unterstützt. Eine dysregulierte Expression oder Signalgebung von RALBP1 ist in mehreren Tumorkontexten mit veränderter Proliferation, Invasion und Therapieresistenz assoziiert und ist damit relevant für mechanistische Studien zur onkogenen Signalübertragung und zellulären Stressanpassung.

Ral BP-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RALBP1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Ral BP-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RALBP1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RALBP1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Ral BP-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RALBP1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Ral BP-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Ral BP-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RALBP1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.