Ral A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403983

概要

RALA は、Ras 関連の低分子 GTPase である RalA をコードしており、GDP 結合状態と GTP 結合状態の間を循環することで、Ras ファミリーからの入力の下流におけるシグナル伝達を統合的に制御する。活性化した RalA は、エキソシスト複合体や RalBP1 などのエフェクターを介して、小胞輸送、極性を伴うエキソサイトーシス、エンドサイトーシス、アクチン細胞骨格の再構築を調節し、膜動態を細胞移動および増殖と結び付ける。RalA シグナルは MAPK および PI3K 関連ネットワークとも連関し、細胞質分裂やミトコンドリアの恒常性の制御にも寄与する。RALA 活性の破綻は、がん化シグナルの文脈や細胞運動プログラムの変化に関与するとされ、腫瘍生物学や転移関連経路の機序解明研究において重要である。

Ral A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRALA遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RALA内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RALAのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Ral Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Ral Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RALA欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Ral Aの機能に不可欠なRALAエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RALAゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Ral A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRal A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RALA遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Ral A HDRプラスミド（h）および Ral A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRALAホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRALA標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。