RAI15 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405878

Descripción general

SMYD5 codifica una metiltransferasa de lisina que contiene dominios SET y MYND, implicada en la regulación de la cromatina y el control transcripcional, y que respalda programas dependientes del contexto que moldean la identidad celular y las respuestas al estrés. Mediante la modulación de la metilación de histonas y otras proteínas, SMYD5 se asocia a vías epigenéticas que influyen en procesos guiados por el ADN, incluida la ensambladura de la cromatina acoplada a la replicación y la dinámica de la expresión génica. La actividad desregulada de SMYD5 se ha relacionado con señales inflamatorias alteradas y estados transcripcionales oncogénicos en múltiples sistemas modelo, lo que la hace relevante para desentrañar mecanismos de progresión tumoral y fenotipos relacionados con el sistema inmunitario. En células humanas, el análisis de redes dependientes de SMYD5 puede aclarar cómo los modificadores epigenéticos integran señales para regular la proliferación y la diferenciación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RAI15 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SMYD5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SMYD5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SMYD5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RAI15.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SMYD5 para la investigación de la señalización de RAI15, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SMYD5 críticos para la función de RAI15
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SMYD5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RAI15 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RAI15 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SMYD5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RAI15 (h) y el plásmido HDR RAI15 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SMYD5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SMYD5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.