Plasmide CRISPR d'Activation (m) Radixin: sc-422634-ACT

Le gène Rdx de la souris code la radixin, une protéine d’échafaudage de la famille ERM (ezrine–radixine–moésine) qui relie l’actine F corticale aux protéines transmembranaires afin d’organiser l’architecture membranaire. La radixin participe à la formation des microvillosités, à la polarité cellulaire et à la stabilité des jonctions d’adhérence, et elle contribue à coordonner des plateformes de signalisation qui modulent la dynamique des GTPases Rho et le remodelage du cytosquelette. Par ces fonctions, la radixin contribue à la migration cellulaire régulée et aux propriétés de barrière épithéliale, des processus couramment étudiés en biologie du développement et dans les travaux sur l’homéostasie tissulaire. Les altérations du couplage membrane–cytosquelette dépendant des ERM et de la régulation des jonctions sont fréquemment examinées dans des modèles d’invasion, d’inflammation et de progression métastatique, ce qui fait de Rdx un nœud pertinent pour la recherche mécanistique.

Radixin Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Rdx sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Radixin Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Rdx dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Rdx, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Radixin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Rdx natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Radixin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Radixin dans les cellules tumorales présentant une expression de Rdx silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.