Plasmide Double Nickase (h) Rad54: sc-401750-NIC

RAD54L code pour l’ATPase humaine Rad54 dépendante de l’ADN, un composant central de la recombinaison homologue qui remodèle la chromatine et favorise l’invasion de brin médiée par RAD51 lors de la réparation des cassures double brin de l’ADN. Rad54 agit au sein du réseau de réparation de l’ADN Fanconi anemia/BRCA afin de soutenir la stabilité des fourches de réplication, de faciliter la réparation post-réplicative et de préserver l’intégrité du génome en situation de stress génotoxique. La perturbation de RAD54L altère la recombinaison à haute fidélité et peut orienter la réparation vers des voies plus mutagènes, contribuant aux réarrangements chromosomiques et à l’accumulation de mutations observés en cancérologie. RAD54L est donc largement utilisé comme point d’entrée mécanistique pour étudier la signalisation de la réponse aux dommages de l’ADN, la dynamique de recombinaison et les déterminants de l’instabilité génomique.

Rad54 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RAD54L dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RAD54L. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RAD54L. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RAD54L.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.