Rad51C CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403060-ACT

Human RAD51C kodiert Rad51C, ein RAD51-Paralog, der in der homologen Rekombination und im Fanconi-Anämie/BRCA-DNA-Schadensantwort-Netzwerk zur Aufrechterhaltung der Genomstabilität wirkt. Rad51C trägt zur Dynamik der RAD51-Nukleoproteinfilamente, zur Verarbeitung von Holliday-Junctions und zur Reparatur von DNA-Doppelstrangbrüchen bei, die unter Replikationsstress entstehen. Durch diese Aktivitäten unterstützt RAD51C die Integrität des S‑Phasen-Checkpoints und verhindert die Anhäufung chromosomaler Aberrationen. Eine veränderte RAD51C-Funktion oder -Expression wurde mit einer beeinträchtigten DNA-Reparaturkapazität und Phänotypen genomischer Instabilität in Verbindung gebracht, wie sie in der Krebsbiologie und bei erblichen DNA-Reparaturerkrankungen untersucht werden.

Rad51C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RAD51C-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Rad51C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RAD51C-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RAD51C-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Rad51C-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RAD51C-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Rad51C-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Rad51C-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RAD51C-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.