Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Rad23B Double Nickase Plasmid (h): sc-402106-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Rad23B Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Rad23B Double-Nickase-Plasmid (h) und Rad23B Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RAD23B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Rad23B: sc-137088
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Rad23B Double Nickase Plasmid (h) | sc-402106-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rad23B Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402106-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes RAD23B kodiert Rad23B, einen Ubiquitin-Rezeptor und DNA-Reparaturfaktor, der die Nukleotid-Exzisionsreparatur (NER) über Interaktionen mit dem 26S-Proteasom mit der Proteostase koppelt. Rad23B ist an der Erkennung und Verarbeitung helixverzerrender DNA-Schäden beteiligt und trägt nach UV- sowie chemisch induzierten Schäden zur Aufrechterhaltung des Genoms bei, während es zugleich den ubiquitinabhängigen Abbau moduliert, indem es an ubiquitinierte Substrate bindet. Über diese Funktionen unterstützt RAD23B zelluläre Antworten auf Replikationsstress und DNA-Schadens-Signalwege, die die Zellzykluskontrolle beeinflussen. Eine Fehlregulation von NER- und Ubiquitin–Proteasom-Wegen unter Beteiligung von RAD23B wurde in experimentellen Modellen mit veränderter genomischer Stabilität und krebsrelevanten Phänotypen in Verbindung gebracht.
Rad23B Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RAD23B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RAD23B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RAD23B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RAD23B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.