Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rad21 (m): sc-422577

Présentation

Rad21 code une sous-unité essentielle du complexe cohésine, qui stabilise la cohésion des chromatides sœurs et organise la structure de la chromatine à un niveau supérieur. Grâce au chargement de la cohésine et à sa libération régulée au cours du cycle cellulaire, RAD21 contribue à une ségrégation fidèle des chromosomes, à la réparation des cassures double brin de l’ADN et à la stabilité des fourches de réplication, reliant ainsi cette protéine aux voies de maintien de l’intégrité du génome. Le bouclage de la chromatine médié par RAD21 participe également à la régulation transcriptionnelle en coordonnant les contacts entre enhancers et promoteurs et les interactions avec des facteurs tels que CTCF. La perturbation ou la dérégulation des composants de la cohésine, y compris RAD21, est associée à une instabilité chromosomique et à des phénotypes développementaux liés à la cohésine, faisant de Rad21 une cible majeure pour des études mécanistiques dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Rad21 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rad21 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rad21, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rad21 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Rad21.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rad21 pour l'étude de la signalisation de Rad21, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Rad21 essentiels à la fonction de Rad21
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rad21 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Rad21 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Rad21 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rad21. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Rad21 plasmide HDR (m) et le Rad21 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rad21 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rad21 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.