Rad21 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422577

Panoramica

Rad21 codifica una subunità fondamentale del complesso della coesina, che stabilizza la coesione tra cromatidi fratelli e organizza la struttura della cromatina di ordine superiore. Attraverso il caricamento della coesina e il suo rilascio regolato durante il ciclo cellulare, RAD21 sostiene la corretta segregazione dei cromosomi, la riparazione delle rotture a doppio filamento del DNA e la stabilità della forcella di replicazione, collegandosi così alle vie di mantenimento del genoma. Il looping della cromatina mediato da RAD21 contribuisce anche alla regolazione trascrizionale coordinando i contatti enhancer–promoter e le interazioni con fattori quali CTCF. L’alterazione o la disregolazione dei componenti della coesina, incluso RAD21, è associata a instabilità cromosomica e a fenotipi di sviluppo correlati alla coesina, rendendo Rad21 un bersaglio chiave per studi meccanicistici in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rad21 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rad21 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rad21 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rad21 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rad21.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rad21 per lo studio della segnalazione di Rad21, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rad21 critici per la funzione di Rad21
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rad21 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Rad21 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Rad21 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rad21. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Rad21 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Rad21 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rad21 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rad21 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.