Rab11-FIP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405735
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Rab11-FIP3 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Rab11-FIP3-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Rab11-FIP3: sc-517043
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Rab11-FIP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-405735 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
RAB11FIP3 kodiert das Rab11-Familien‑interagierende Protein 3 (Rab11‑FIP3), einen Rab11‑Effektor, der die Funktion von Recyclingendosomen und den Membrantransport während der Zytokinese koordiniert. Rab11‑FIP3 hilft, das endozytische Recycling und die Vesikeladressierung zum Midbody zu steuern, unterstützt dadurch die Abscission und einen ordnungsgemäßen Zellzyklusverlauf und ist in RAB11‑abhängige Transportrouten eingebunden, die das Rezeptorrecycling und die Zellpolarität prägen. Über seine Rolle in der Dynamik von Recyclingendosomen trägt Rab11‑FIP3 zu Prozessen bei, die Zellmigration und Proliferation beeinflussen, und ist damit relevant für Studien zu fehlreguliertem Trafficking bei krebsassoziierten Phänotypen. Eine veränderte Expression oder funktionelle Störung von Rab11‑FIP3 wurde zudem mit Defekten in der Zellteilung und in Membranumbau‑Signalwegen in Verbindung gebracht, die die genomische Stabilität beeinträchtigen können.
Das Rab11-FIP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RAB11FIP3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RAB11FIP3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RAB11FIP3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rab11-FIP3-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RAB11FIP3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rab11-FIP3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf RAB11FIP3-Exone abzielen, die für die Rab11-FIP3-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere RAB11FIP3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Rab11-FIP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Rab11-FIP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RAB11FIP3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rab11-FIP3 HDR-Plasmid (h) und Rab11-FIP3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RAB11FIP3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RAB11FIP3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.