Plásmido Doble Nickase (h) Rab GDI β: sc-404136-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Rab GDI β consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Rab GDI β (h) y el plásmido de doble nickasa Rab GDI β (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GDI2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Rab GDI β Anticuerpo (D-2): sc-515143
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Rab GDI β | sc-404136-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Rab GDI β | sc-404136-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GDI2 codifica el inhibidor beta de la disociación de GDP de Rab (Rab GDI β), una chaperona citosólica que se une a las GTPasas Rab preniladas y regula su extracción de las membranas y su reciclaje entre compartimentos del sistema endomembranoso. Al controlar la disponibilidad de Rab y su direccionamiento a membranas, Rab GDI β influye en los eventos de gemación, transporte y fusión de vesículas, fundamentales para la endocitosis, la exocitosis y el tráfico del Golgi al endosoma. Esta regulación afecta el recambio de receptores, la dinámica de la vía secretora y la identidad de los orgánulos dentro del ciclo de las GTPasas Rab. La desregulación del tráfico de Rab y de la función de sus reguladores se ha implicado en respuestas de estrés celular y en alteraciones de la proteostasis observadas en múltiples contextos relevantes para enfermedades, lo que respalda el uso de la perturbación de GDI2 para investigar fenotipos dependientes del tráfico.
Rab GDI β El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GDI2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GDI2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GDI2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GDI2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.