Plásmido Doble Nickase (h) Rab GDI α: sc-404659-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Rab GDI α consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Rab GDI α (h) y el plásmido de doble nickasa Rab GDI α (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GDI1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Rab GDI α Anticuerpo (C-7): sc-271846
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Rab GDI α | sc-404659-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Rab GDI α | sc-404659-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GDI1 codifica el inhibidor alfa de disociación de GDP de Rab (Rab GDI α), un regulador citosólico que se une a las GTPasas Rab preniladas y controla su extracción de las membranas, su solubilización y su entrega a compartimentos diana durante el tráfico vesicular. Al modular el ciclo de Rab entre los reservorios asociados a membrana y al citosol, Rab GDI α ayuda a coordinar el transporte endocítico y exocítico, la identidad de los orgánulos y la dinámica de membranas en rutas como el transporte de endosoma a Golgi y el reciclaje de vesículas sinápticas. El funcionamiento adecuado de GDI1 sostiene las exigencias de tráfico en neuronas, y la alteración de la regulación del transporte dependiente de Rab se ha vinculado a fenotipos del neurodesarrollo y cognitivos. En sistemas humanos, GDI1 se estudia con frecuencia como un nodo que conecta la señalización de GTPasas Rab con la proteostasis, la renovación de receptores de membrana y la fidelidad del transporte específico de cada compartimento.
Rab GDI α El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GDI1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GDI1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GDI1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GDI1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.