Rab GDI α Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404659

Descripción general

GDI1 codifica el inhibidor alfa de disociación de GDP de Rab (Rab GDI α), una chaperona citosólica que se une a las GTPasas Rab preniladas y regula su extracción de las membranas, su solubilización y su reciclaje entre compartimentos donadores y aceptores. Al controlar la disponibilidad y la localización de Rab, Rab GDI α ayuda a coordinar la gemación, el tráfico y la fusión de vesículas a lo largo de las vías endocíticas y secretoras, manteniendo la identidad de los orgánulos y la clasificación de la carga. La alteración de GDI1 perturba redes de tráfico dependientes de Rab que son críticas para el ciclo de las vesículas sinápticas y la homeostasis neuronal, vinculando el transporte de membrana alterado con fenotipos de enfermedades del neurodesarrollo y neurológicas. Como nodo central en la regulación de pequeñas GTPasas, GDI1 se estudia con frecuencia en el contexto de la dinámica de endosomas, el transporte del Golgi a la membrana plasmática y la función sináptica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Rab GDI α (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GDI1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GDI1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GDI1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Rab GDI α.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GDI1 para la investigación de la señalización de Rab GDI α, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GDI1 críticos para la función de Rab GDI α
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GDI1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Rab GDI α CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Rab GDI α CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GDI1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Rab GDI α (h) y el plásmido HDR Rab GDI α (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GDI1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GDI1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.