Rab 7L1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403366

Übersicht

RAB29 kodiert Rab7L1, eine kleine Rab-GTPase, die den Membrantransport reguliert und dabei vor allem am trans-Golgi-Netzwerk sowie an Schnittstellen zu Endosomen eine wichtige Rolle spielt. Rab7L1 ist an der Abschnürung von Vesikeln, der Sortierung von Fracht und an Recyclingwegen beteiligt, die über koordinierte, GTP-abhängige Interaktionen mit Effektorproteinen die Homöostase lysosomenbezogener Prozesse und die Positionierung von Organellen mitgestalten. In menschlichen Zellen wird RAB29 mit Prozessen in Verbindung gebracht, die für die Biologie von Neuronen und Immunzellen relevant sind, darunter Signalwege mit LRRK2-assoziierter Vesikeldynamik und stressresponsivem Transport. Eine Störung der Rab7L1-Funktion wird daher im Kontext veränderter endolysosomaler Transportprozesse, des Proteinumsatzes und von Signalantworten untersucht, die an neurodegenerationsbezogenen Mechanismen beteiligt sind.

Das Rab 7L1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RAB29-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RAB29-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RAB29 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rab 7L1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RAB29-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rab 7L1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RAB29-Exone abzielen, die für die Rab 7L1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RAB29-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rab 7L1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Rab 7L1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RAB29-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rab 7L1 HDR-Plasmid (h) und Rab 7L1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RAB29-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RAB29-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.