Rab 7 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-422571-ACT

Rab7は、後期エンドソームの成熟、エンドソーム―リソソーム間輸送、ならびにリソソームの細胞内配置を制御する小型GTPアーゼRab7をコードする。Rab7は、小胞の運動性や膜融合を制御するエフェクター群を協調的にリクルートすることで、これらの過程を調節する。マウス細胞では、Rab7はオートファゴソーム―リソソーム融合を促進し、さらにエンドサイトーシスで取り込まれたカーゴの分解を支えることで、オートファジーのフラックスの中核を担い、受容体のターンオーバーや栄養感知経路の形成に寄与する。Rab7依存的な輸送が破綻するとリソソーム恒常性が乱れ、抗原プロセシング、ミトコンドリアの品質管理、神経免疫シグナル伝達に影響し得る。Rab7活性の変化は、細胞内輸送および分解経路の障害を介して、神経変性、末梢神経障害、感染生物学に関わる病態メカニズムと関連づけられている。

Rab 7 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Rab7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rab 7 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Rab7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRab7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rab 7の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRab7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRab 7依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRab7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRab 7経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。