Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rab 5A (m): sc-435445

Présentation

Rab5a code la petite GTPase Rab5A, un régulateur central de la dynamique des endosomes précoces, qui coordonne l’endocytose médiée par la clathrine, l’arrimage et la fusion des vésicules, ainsi que la maturation endosomale via des effecteurs tels qu’EEA1 et des nœuds de signalisation de la PI3K. En contrôlant l’internalisation et le trafic des récepteurs, Rab5A module l’amplitude et la durée de la signalisation en aval de voies telles que EGFR/MAPK et PI3K/AKT, et contribue au recyclage membranaire ainsi qu’au tri des cargos vers la dégradation lysosomale. L’activité de Rab5A est également associée au remodelage du cytosquelette et à la croissance des neurites via le dialogue endosome–actine. Une dérégulation du trafic endocytaire impliquant Rab5a a été impliquée dans des défauts endosomaux liés à la neurodégénérescence, une altération de la prise en charge des récepteurs immunitaires et une signalisation aberrante des récepteurs aux facteurs de croissance dans des modèles de maladies prolifératives.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Rab 5A (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rab5a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rab5a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rab5a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Rab 5A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rab5a pour l'étude de la signalisation de Rab 5A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Rab5a essentiels à la fonction de Rab 5A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rab5a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Rab 5A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Rab 5A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rab5a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Rab 5A plasmide HDR (m) et le Rab 5A (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rab5a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rab5a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.