Rab 5A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-435445

Visão geral

Rab5a codifica a pequena GTPase Rab 5A, um regulador central da dinâmica dos endossomos precoces que coordena a endocitose mediada por clatrina, o ancoramento/fusão de vesículas e a maturação endossomal por meio de efetores como a EEA1 e nós de sinalização de PI3K. Ao controlar a internalização e o tráfego de receptores, a Rab 5A influencia a amplitude e a duração da sinalização a jusante em vias como EGFR/MAPK e PI3K/AKT, além de contribuir para a reciclagem de membrana e a triagem de cargas direcionadas à degradação lisossomal. A atividade da Rab 5A também está ligada à remodelação do citoesqueleto e ao crescimento de neuritos por meio do intercâmbio entre endossomos e actina. A desregulação do tráfego endocítico envolvendo Rab5a tem sido implicada em defeitos endossomais relacionados à neurodegeneração, em alterações no processamento de receptores imunes e em sinalização aberrante de receptores de fatores de crescimento em modelos de doenças proliferativas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Rab 5A (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Rab5a em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Rab5a, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Rab5a na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Rab 5A.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Rab5a para a investigação da sinalização de Rab 5A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Rab5a críticos para a função Rab 5A
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Rab5a para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Rab 5A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Rab 5A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Rab5a. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Rab 5A Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Rab 5A (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Rab5a para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Rab5a definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.