Rab 25 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-424753

Übersicht

Rab25 kodiert die kleine GTPase Rab25, ein Mitglied der Rab11‑Unterfamilie, das den Membrantransport reguliert, einschließlich des endozytotischen Recyclings sowie des polarisierten Transports von Rezeptoren und Integrinen in Epithelzellen. Durch die Kontrolle von Vesikelknospung, Anheftung (Tethering) und Fusion beeinflusst Rab25 die Zellpolarität, Migration und die Signalstärke von Oberflächenrezeptoren, die an Signalwege wie PI3K–AKT gekoppelt sind, sowie das Recycling von Wachstumsfaktorrezeptoren. Eine fehlregulierte RAB25‑Aktivität wurde in mehreren Geweben mit veränderter epithelialer Homöostase und tumorassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, was Rab25 für Untersuchungen zu Invasion, metastasenassoziierten Transportprogrammen und kontextabhängigen onkogenen oder tumorsuppressiven Funktionen relevant macht. In Mausmodellen ermöglicht eine Störung von Rab25 die mechanistische Untersuchung vesikulärer Transportnetzwerke in der Entwicklung und bei krankheitsrelevanten Zellverhaltensweisen.

Das Rab 25 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Rab25-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Rab25-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Rab25 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rab 25-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Rab25-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rab 25-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Rab25-Exone abzielen, die für die Rab 25-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Rab25-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rab 25 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Rab 25 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Rab25-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rab 25 HDR-Plasmid (m) und Rab 25 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Rab25-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Rab25-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.